Isolation and Analytical Characterization of Local Malaysian Leech Saliva

Abstract

Leech saliva contains biologically active compounds that are mainly proteins and peptides. In this study a modified and smooth extraction method of saliva was used without leeches' scarification. UV and Bradford Assay protein methods showed that the saliva extract contains high concentrations of proteins. RP-HPLC chromatogram revealed that more than 30 different peaks were observed in leech saliva extract. Gel electrophoresis revealed the existence of proteins and peptides with different molecular weights. The gel showed up to 25 different bands. Comparison of gel electrophoresis data with protein database revealed the closeness of four molecular weights to known proteins from Hirudinaria leech family. Other proteins detected by gel electrophoresis may be related to completely new biologically active proteins and peptides in the saliva extract or to a modification (isoforms) of the existing ones or finally to a mixture of both.

ABSTRAK: Air liur pacat secara biologinya mengandungi sebahagian besar campuran aktif protein dan peptida. Dalam kajian ini, kaedah pengestrakan air liur pacat yang telah diubah suai digunakan tanpa perlu membunuh pacat. Kaedah protein Cerakin UV dan Bradford menunjukkan air liur pacat yang diekstrak mengandungi konsentrasi protein yang tinggi. Kromatogram RP-HPLC memperlihatkan lebih daripada 30 puncak berbeza diperolehi semasa air liur pacat diekstrak. Gel elektroforesis memperlihatkan kewujudan protein dan peptida dengan berat molekul yang berbeza. Gel menunjukkan hingga 25 jalur yang berbeza. Perbandingan data menggunakan gel elektroforesis seiring dengan pangkalan data protein memperlihatkan persamaan empat berat molekul, dengan protein yang yang dikenali daripada keluarga pacat Hirudinaria. Jenis protein lain yang dikesan dengan menggunakan gel elektrofosis mungkin juga berkait secara biologinya dengan protein dan peptida aktif yang baru, dalam ekstrak air liur atau pengubahsuaian (beberapa jenis yang berbeza daripada protein yang sama) daripada yang sedia ada ataupun gabungan kedua-duanya.

KEY WORDS : leech saliva; RP-HPLC; gel electrophoresis.